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液相分析常見問題⑥ 峰面積變來變?nèi)o法定量
更新時間:2019-07-22   點擊次數(shù):6561次


峰面積是定量分析的基礎(chǔ),峰面積的變化會導(dǎo)致精密度、標(biāo)曲、定量分析等一系列問題

 

那么,如果遇到峰面積不穩(wěn)定的情況,我們要怎么辦?讓我們分三種情況分別來看一看:

 

一、峰面積變小

 

1. 儀器漏液

儀器漏液會導(dǎo)致樣品損失,與正常測定結(jié)果相比,會出現(xiàn)色譜峰減小的情況。

→這種時候,需要檢查系統(tǒng)壓力,確保所有螺絲或連接處無漏液情況,排查儀器方面的原因。

 

2. 樣品穩(wěn)定性不好

有些樣品自身穩(wěn)定性不好,配置后,隨著進(jìn)樣時間的推移會出現(xiàn)降解現(xiàn)象。

→如果連續(xù)進(jìn)樣過程中,主峰的峰面積減小,同時伴隨雜質(zhì)峰面積增加的情況,建議確認(rèn)樣品在溶劑或流動相中的穩(wěn)定性情況。

 

3. 進(jìn)樣瓶中樣品量過少

當(dāng)樣品瓶中樣品過少可能導(dǎo)致進(jìn)樣針未吸取到足夠樣品進(jìn)樣。

添加樣品或使用內(nèi)襯管即可解決。

 

4. 針峰面積減小

進(jìn)樣瓶的瓶蓋擰緊后,瓶內(nèi)會出現(xiàn)負(fù)壓,可能導(dǎo)致進(jìn)樣器取樣不準(zhǔn)確。

→第二次進(jìn)樣時,由于瓶蓋已經(jīng)有孔,負(fù)壓消除后進(jìn)樣峰面積會恢復(fù)正常;也可通過使用預(yù)開口進(jìn)樣小瓶來解決該類問題。

 

二、峰面積變大

 

可能是由于色譜柱或流動相條件導(dǎo)致樣品吸附,特別是一些帶電荷情況較為復(fù)雜的蛋白或多肽類樣品。

→大濃度進(jìn)樣、平衡可能的吸附位點

更換色譜柱優(yōu)化方法

(推薦更換MG、MGII、或Proteonavi進(jìn)行嘗試)

 

▲CAPCELL PAK 聚合物包被結(jié)構(gòu)示意圖

 

Proteonavi

 

Proteonavi是采用在多孔球形硅膠填料表面鍵合丁基(C4的高性能蛋白質(zhì)•多肽分析色譜柱。該填料既具有硅膠類填料的高分離能力耐壓性,又具有耐酸性、抑制蛋白質(zhì)吸附等特長。

 

★ 具備*的耐酸性

★ 填料表面的蛋白吸附,即使樣品量少也能被檢出

★ 可對應(yīng)從分析到制備的規(guī)模擴(kuò)大化

 

三、峰面積忽大忽小,變化無規(guī)律

 

1. 自動進(jìn)樣器故障或混入氣泡

→進(jìn)樣過程中,觀察進(jìn)樣針中無氣泡混入,如果自動進(jìn)樣器出現(xiàn)故障,需要咨詢相應(yīng)品牌儀器工程師。

 

2. 樣品過于黏稠會導(dǎo)致進(jìn)樣不準(zhǔn)確

稀釋樣品通??梢越鉀Q

 

3. 進(jìn)樣瓶中混入氣泡

→部分樣品容易混入氣泡,比如一些表面活性劑類樣品,觀察進(jìn)樣瓶中是否有小氣泡,或者對進(jìn)樣瓶進(jìn)行超聲脫氣

 

PS: 以上對策主要針對液相分析檢測中出現(xiàn)峰面積不穩(wěn)的情況,如果在質(zhì)譜分析中出現(xiàn)峰面積不穩(wěn),則可能會有離子化、基質(zhì)效應(yīng)等其他原因。

 

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